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【新冠】核酸提取或純化試劑

貨號:CZ330

規格:10T/盒& 50T/盒&100T/盒

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實驗原理本試劑盒提供了一種簡單、快速、高效的從全血、組織勻漿液、拭子,以及血 清、血漿、肺泡灌洗液等無細胞體液中提取DNA/RNA的方法。獨特的緩沖體系使裂解液中的核酸高效特異地結合在磁珠上,獲得的核酸純度高,質量穩定,不含蛋白、核酸酶和其他雜質。可適用于各種常規操作,包括PCR、熒光定量PCR等實驗。具有在特定的鹽離子濃度和pH值條件下,磁珠吸附RNADNA,當條件改變時,磁珠釋放RNADNA,達到快速分離純化RNADNA效果。

主要組成成分

試劑盒組成

保存

CZ330-10

CZ330-50

CZ330-100

PBS溶液

室溫

5mL/瓶×1

20mL/瓶×1

40 mL /瓶×1

磁珠懸浮液

2-8℃

110μl/×1

550μl×1

1.1mL×1

蛋白酶K

-20

300μl/支×1

1mL /支×2

2mL /瓶×1

洗液1(wash1)

室溫

10mL/瓶×1

72 mL/瓶×1

72 mL/瓶×2

洗液2wash2

室溫

6mL/瓶×1

24 mL/瓶×1

24mL/瓶×2

RNA酶水

室溫

1mL/瓶×1

5mL /瓶×1

10mL /瓶×1

說明書

室溫

1

1

1

另需要準備的試劑及注意事項

無水乙醇、預冷的異丙醇(分析純)。

磁珠初次使用時,必須劇烈搖晃1-2min,使磁珠分散。

不同批次試劑不可以混用。

儲存條件及有效期

蛋白酶K: -20℃:長期保存,避免反復凍融,融化后4℃保存,并盡快使用;

磁珠懸浮液:2-8℃保存;

其它組分:室溫保存。

適用儀器】磁力架或核酸提取儀

樣品要求本試劑盒適用于從全血、組織勻漿液、拭子,以及血 清、血漿、肺泡灌洗液等無細胞體液中提取DNA/RNA的方法。

 

使用方法

實驗準備:

使用前,請按下表準確加入無水乙醇。

 成分

CZ330-10

CZ330-50

CZ330-100

洗液1wash1

10ml

72ml

72ml

無水乙醇

8ml

48ml

48ml

 

 成分

CZ330-10

CZ330-50

CZ330-100

洗液2wash2

6ml

24ml

24ml

乙醇

24ml

96ml

96ml

操作步驟

(磁力架)

1. 樣品處理:

1.1 取1.5 mL離心管(自備),加入200 μL樣本,20 μL蛋白酶K, 200 μLPBS溶液, 300 μL異丙醇,渦旋震蕩5秒后,置于室溫,1200 rpm的恒溫混勻儀上震蕩混勻10 分鐘。

注:濕拭子樣本咽拭子,及加了病毒保存液的樣本),充分震蕩混勻后取200 μL進行提取。干拭子樣本浸泡于400 μL生理鹽水中,充分震蕩 混勻后靜置5分鐘,12,000 rpm離心1分鐘后,取200 μL進行提取。

2. 向離心管中加入10 μL磁珠懸浮液,渦旋震蕩10秒,置于室溫,1200 rpm的恒溫混勻 儀上震蕩混勻5分鐘。

3. 將離心管置于磁力架,磁珠完全吸附后,小心吸棄所有液體。

4. 將離心管小心從磁力架上取下,加入600 μl洗液1wash1使用前請檢查是否已加入指定量的無水乙醇,渦旋混勻1min。

5. 放置磁力架上磁吸60 sec,待磁珠完全吸附時小心移去液體。

6. 將離心管小心從磁力架上取下,加入600 μl洗液2wash2使用前請檢查是否已加入指定量的無水乙醇,渦旋混勻1min。

7. 放置磁力架上磁吸60 sec,待磁珠完全吸附時小心移去液體。

8. 離心管放置磁力架上,室溫晾干1-2 min。

9. 將離心管從磁力架上取下,加入20 μlRNA酶水,渦旋混勻,56,1200 rpm的恒溫混勻儀上 震蕩混勻5分鐘。

10. 將離心管放置于磁力架上3min,待磁珠完全吸附時小心轉移核酸溶液至新的無RNase、DNase離心管中,并保存-20℃或進入下一步實驗。

(以核酸提取儀smart-32(達安基因股份有限公司)為例)

1.試劑分裝至96孔板中。

按下表將準備好的試劑轉移至對應的孔中(單位:μl。


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12


異丙醇

洗液1

洗液1

洗液2

洗液2

RNA酶水

異丙醇

洗液1

洗液1

洗液2

洗液2

RNA酶水

A

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

B

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

C

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

D

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

E

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

F

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

G

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

H

300

600

600

600

600

35

300

600

600

600

600

35

2. 參考(磁力架)部分步驟(1.2.)處理樣品,將處理好的樣品,轉移至對應孔1、7中。

3. 打開核酸提取儀的倉門,將準備好的樣品板(注:已經加入試劑和樣品的96孔板)放入提取內的卡槽中,插好攪拌套,關閉倉門,

4. 按照如下表,編輯、運行提取程序

步驟

槽位

名稱

等待時間

min

混合時間

min

吸磁時間

sec

混合模式

體積

μl

溫度狀態

溫度

℃)

1

1

裂解

0

10

0

5

500

加熱

0

2

1

結合

0

5

180

5

500

關閉

0

3

2

洗滌1

0

1

90

8

600

關閉

0

4

3

洗滌1

0

1

90

8

600

關閉

0

5

4

洗滌2

0

1

90

8

600

關閉

0

6

5

洗滌2

0

1

90

8

600

關閉

0

7

6

洗脫

0.5

5

180

8

35

加熱

65

8

1

棄磁珠

0

0.5

0

3

800

關閉

0

5. 程序運行完畢,轉移孔6、12DNA/RNA至新的無RNase、DNase離心管,并保存-20℃或進入下一步實驗。

檢驗方法的局限性】本試劑盒適用于全血、組織勻漿液、拭子,以及血 清、血漿、肺泡灌洗液等無細胞體液中提取DNA/RNA;標準情況下,純化的DNAOD260/280比值在1.82.0之間。但是,當DNA濃度低于10 ng/μL時,偶爾發現該比值會偏離預期。 

【檢驗結果的判定】DNA純度:OD260/OD280≈1.7~2.0 (>2.0,表明有RNA污染;<1.7,表明有蛋白質、酚等污染)。

注意事項

1. 洗液(wash1、wash2)中含有易揮發成份,保存時確保瓶蓋旋緊。

2. 裂解液(Buffer ABL)在低溫下容易有晶體析出,請置于65水浴溶解。

3. 實驗開始前,請清潔工作臺,并進行消毒。

4. 試劑使用前應在常溫下混勻。


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